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涕灭威属于氨基甲酸酯类农药，广泛应用于杀虫、杀螨、除草等方面。同其它氨基甲酸酯类农药一样，涕灭威在植物的代谢途径有，首先是水解成氨基甲酸 （carbamic?acid），再分解成CO2??和胺。除水解外，还发生氧化反应生成涕灭威亚砜和涕灭威砜两种主要的毒性化合物。由于涕灭威及其氧化 产物涕灭威亚砜、涕灭威的小鼠LD50分别为0.9mg/kg、0.9mg/kg和25mg/kg，均被认为是毒理学上有重要意义的代谢物[1~3]，所 以研究涕灭威在环境和农作物中的残留必须同时考虑涕灭威及其2个氧化产物。我国GB2763-2005中规定涕灭威及其亚砜、砜的和以涕灭威计，花生油中 最大残留限量为0.04mg/kg。日本肯定列表制度中，涕灭威的暂定标准0.05?mg/kg?，涕灭威亚砜和涕灭砜威（涕灭氧威）适用的是 0.01?mg/kg的“一律标准”。
目前我国关于花生油中涕灭威残留量的测定方法参考GB/T14929.2-1994中《花生仁、棉籽油、花生油中涕灭威残留量的测定方法》，用强酸将样品 中涕灭威和涕灭威亚砜氧化为涕灭威砜，以气相色谱（FPD检测器）进行测定以响应最好的代谢物涕灭威砜代替总量，但是目前国际上需要测定涕灭威及其亚砜和 砜两种代谢物，而且原有方法的灵敏度、选择性和适用范围等方面均不能满足目前的检测要求，难以适应日益发展的社会需求。基于上述的原则，同时结合目前测定 涕灭威及其氧化产物测定方法的文献[4~12]，且凝胶渗透色谱技术可用于复杂基质样品的净化处理[13~16]，建立了凝胶渗透色谱-高效液相色谱-串 联质谱法测定花生油中涕灭威及其代谢产物残留量方法。
1?材料与方法1.1?仪器高效液相色谱-串联四极杆质谱仪：Waters?Acquity?UPLC?串联Quattro?Micromass?三重四极杆质谱（美国Waters 公司）：凝胶渗透色谱仪（带在线浓缩装置和紫外检测器，德国LCTech公司），??S-X3凝胶色谱柱填料（美国Bio－Bead公司），氮吹仪（美国 OI公司），0.45μm有机相滤膜（上海安普公司）。1.2?试剂乙酸乙酯、环己烷、甲醇均为色谱纯（美国Merck公司）；乙酸铵（南京化学试剂厂，≥98.0%），超纯水用millipore纯水机制备所得。1.3?标准物质涕灭威（Aldicarb，CAS：116-06-3）、涕灭威亚砜（Aldicarb?sulfoxide，CAS：1646-87-3）、涕灭威砜 （Aldicarb?sulfone，CAS：1646-88-4）和d3-涕灭威标准品均购自德国Dr.?Ehrenstorfer公司（纯度为 98.5%）。单标准储备液：准确称取涕灭威、涕灭威亚砜、涕灭威砜各10mg，分别置于10mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度。得到1mg/mL的标准贮备液。4℃下可保存6个月。混合标准溶液：取适量的涕灭威、涕灭威亚砜、涕灭威砜标准贮备液，用甲醇分别稀释至含0、0.10、0.20、0.50、1.00、2.00、5.00mg/mL涕灭威、涕灭威亚砜、涕灭威砜的混合标准使用液。临用前配置内标溶液：称取d3-涕灭威适量用甲醇稀释至0.1mg/mL贮备液，4℃冰箱中保存。使用前用甲醇稀释至1.0mg/mL作为使用液。1.4?色谱条件色谱柱为Waters?Atlantis?C18色谱柱（150?mm×2.1?mm，5mm），?流动相A为甲醇；流动相B为10mmol/L乙酸铵溶液，梯度洗脱程序见表1，流速0.3mL/min，进样量10μL，柱温：30℃。?表1??高效液相色谱梯度洗脱条件Table?1?Condition?of?HPLC?gradient?elution?????????????????? ?Mobile?phase：A，methanol；?B，10mmol/L?ammonium?acetate?1.5?质谱条件电喷雾正离子化源（ESI+）；毛细管电压3.5kV，离子源温度100℃，雾化气温度300℃，脱溶剂气500L/h，锥孔反吹气20L/h，MRM监测模式，具体条件见表2。表2??MRM分析的质谱参数Table?2?Analysis?paraments?of?multiple?reaction?monitoring????????????????? △?定量离子???????*定性离子1.6?样品处理取2g花生油（精确至0.01g），加入0.10mLd3-涕灭威内标使用液，用乙酸乙酯-环己烷（1+1,v/v）稀释至10mL。取 5.0mL进凝胶渗透色谱净化，待花生油峰出完后，立即开始收集洗脱液，收集1300s~2400s洗脱液，凝胶渗透色谱的具体参数见表3，洗脱液于 50℃下减压浓缩至5.0mL。得到的备用浓缩液相当于含1.0g花生油。取出并进一步浓缩至1.0mL，作为待测液。表3?凝胶渗透色谱技术参数Tablie?3?paraments?of?Gel?Permeation?Chromatography2结果2.1?涕灭威及其代谢产物涕灭威亚砜和涕灭威砜的分离 ??? 采用ESI正离子模式扫描方式下，涕灭威?m/z208[M+NH4]峰明显，选择m/z208为母离子，当锥孔电压10V，碰撞能量为14V时，子离子 m/z116?[M—CH3NHCOO]和m/z89[M—CH3NHCOONCH，即(CH3)2SCH3]信号最强，其中m/z89有更强的信号，因 此选择208→116为定性离子，208→89为定量离子。同理涕灭威亚砜，选择m/z207[M+H]为母离子，m/z207→132[M- CH3NHCOO]为定量离子,m/z207→89?[-C(CH3)2SCH3]为定性离子，锥孔电压14V，碰撞能量为8V。涕灭威砜选择m /z223[M+H]为母离子，m/z223→148[M-CH3NHCOO]为定量离子,m/z207→86?[-O-N=CH-CH(CH3)2]为 定性离子，锥孔电压20V，碰撞能量为9V。d3-涕灭威m/z211→116为定性离子，m/z211→89为定量离子涕灭威、涕灭威亚砜、涕灭威砜及d3-涕灭威的MRM离子流图（图1）。?????????图1?MRM模式下3种目标化合物及d3-涕灭威的定量离子色谱图??????Fig.?1??Quantitative?ion?chromatography?of?3?standards?and?d3-aldicarb?in?MRM?mode1.?aldicarb?sulfoxide???2.?aldicarb?sulfone???3.?aldicarb????4.?d3-aldicarb2.2?方法的线性范围和检出限取7份2g不含目标化合物的空白花生油（精确至0.01g），分别加入0.10mL混合标准溶液，再加入0.10mL1.0mg/mLd3-涕灭威内标使 用液，按样品处理方法（1.6）得浓缩液，每浓缩液含涕灭威、涕灭威亚砜和涕灭威砜的浓度分别为0、5、10、20、50、100、250ng/mL，作 为工作溶液系列。分别进样10μL，以标样的峰面积与内标峰面积的比值为纵坐标，以浓度为横坐标，绘制标准曲线，并进行线性回归，得到线性方程。以信噪比 （S/N）为3作为检出限（LOD）。结果见表4.表4??3种目标化合物的线性范围、线性方程、相关系数（r2）、检出限Table?4??Linear?ranges?、linear?equations、correlation?coefficients(r2)and?limits?of?detections(LOD)2.3?精密度和回收率称取2g的花生油12份，分别添加10μg/kg、100μg/kg二个水平浓度的标准溶液后，按照样品的处理方法净化和浓缩处理，浓缩液进样分 析，每个添加水平平行测定6份，回收率为85.2%～117.4%，相对标准偏差为7.59%～11.0%，结果见表5。表5?方法的回收率（n=6）及相对标准偏差Table?5??Average?recovery（n=6）and?RSD2.4?样品分析对市场上花生油样品进行检测，检出结果均为阴性。样品加标测定时目标化合物的保留时间、定性定量离子的比值均符合欧盟的规定[17]3?讨论3.1?凝胶渗透色谱条件的选择用标准品通过GPC色谱柱时出峰的先后顺序是涕灭威砜、涕灭威亚砜和涕灭威，加标样品通过GPC色谱柱时涕灭威砜的保留时间显著提前，且紧挨着花 生油峰，因此在样品处理时综合考虑花生油洗脱液收集时间从1300秒开始到2400s结束。三个目标化合物的分子量从190到222，差距只有32，但在 GPC上保留时间差距达到1100s，可能是花生油基质的影响。3.2?液相色谱柱条件的选择??由于涕灭威砜和涕灭威亚砜、涕灭威的极性相差较大，且涕灭威砜和涕灭威亚砜的极性较强，本文比较了Waters公司的 SymmertyC18（150mm×2.1mm，5μm）柱和Atlanis?C18（150mm×2.1mm，5μm）柱。在现有的流动相条件下 SymmertyC18不能实现目标化合物涕灭威砜和涕灭威亚砜的显著分离，在Atlantis柱上可实现完全分离。同时还在现有条件下考察了 Shiseido公司的Capcell?CR（1：4）色谱柱（150mm×2.1mm，5μm）也可实现完全分离。本文实验中采用Atlantis柱。3.3?标标准曲线和工作曲线的比较本文在用标准曲线测定样品加标回收率试验时，涕灭威亚砜和涕灭威砜的回收率最高达到200%，考虑到可能是样品基质的干扰，进行了工作曲线实验，在不含目 标化合物的空白花生油中分别加入混合标准溶液和内标溶液，按2.2项下的步骤开展实验，所得的曲线斜率对涕灭威亚砜和涕灭威砜而言显著大于标准曲线，而对 涕灭威由于同位素内标的存在没有明显的影响。详见图2。?所以本实验采用工作曲线。?????????????????????????????????????图2??3个目标化合物标准曲线和工作曲线Fig.?2??Calibration?curves?and?matrix-matched?calibration?curves?of?3?target?compounds1、aldicarb????2、aldicarb?sulfoxide??3、aldicarb?sulfone■?matrix-matched?calibration?curves??◆?Calibration?curves本文建立的方法可同时测定花生油中涕灭威及其代谢产物涕灭威亚砜、涕灭威砜残留量。该方法较现有的国标GB/T?14929.2-94仅测定涕灭威砜的气相色谱方法定性定量更准确，且检出限均能满足欧盟和日本肯定列表对代谢产物的限量要求。